以液體過(guò)柱但填料保持濕潤(rùn)為標(biāo)準(zhǔn),按照說(shuō)明書參數(shù)操作即可。如果整管沒(méi)有離心下去,可以重復(fù)離心幾次,或者考慮可能是蛋白濃度過(guò)高引起,需要稀釋樣本后取1-10 μg蛋白上樣。
不含??梢罁?jù)說(shuō)明書中的相關(guān)內(nèi)容自行加入 iRT。也可以替換成實(shí)驗(yàn)室常用的復(fù)溶多肽的溶劑。
對(duì)于 timsTOF 型儀器(Bruker),溶解多肽至 200 ng/μl,進(jìn)樣 1 μl。若初始樣本處理量小于 500 ng 則建議用 5 μl Dissolve B 溶解樣本,進(jìn)樣 4 μl; 對(duì)于 Orbitrap 型儀器(Thermo)按照樣品初始處理量溶解多肽至 1 μg/μl,例如初始處理 10 μg 樣本則使用 10 μl Dissolve B 溶解多肽,進(jìn)樣 1~3 μl。若初始樣本處理量小于 2 μg 則建議用 5 μl Dissolve B 溶解樣本,進(jìn)樣 4 μl。
可以,建議重復(fù)使用。需在每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將適配器 Adaptor 浸沒(méi)于無(wú)水乙醇中進(jìn)行超聲清洗(專用玻璃燒杯),自然干燥后儲(chǔ)存于專用玻璃燒杯并使用錫紙密封,待下次使用。
復(fù)溶后需要在3h內(nèi)使用,不建議保存再用。