創(chuàng)新性的引入多色免疫熒光,同時(shí)兼容H&E染色等多種染色方式,通過將自動化全視野的AI智能識別成像系統(tǒng)、定位系統(tǒng)與顯微切割系統(tǒng)整合為一體,進(jìn)行自動化精準(zhǔn)定位、導(dǎo)航和切割,在高深度蛋白質(zhì)組檢測的同時(shí)獲取單細(xì)胞分辨率的精準(zhǔn)空間位置信息,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)細(xì)胞類型、目標(biāo)蛋白表達(dá)的空間可視化。
基于空間可視化蛋白質(zhì)組項(xiàng)目專用的空間膜片,可以銜接染色成像和顯微切割兩套系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)同一張切片進(jìn)行全流程的空間可視化蛋白質(zhì)組檢測。因此正式切片樣本應(yīng)提前聯(lián)系我們獲取專用空間膜片進(jìn)行貼片后送樣,已經(jīng)置于普通病理玻片上的切片樣本無法進(jìn)行完整的空間可視化蛋白質(zhì)組檢測。
空間可視化蛋白質(zhì)組項(xiàng)目關(guān)注明確的目標(biāo)區(qū)域或細(xì)胞類型。為了判斷是否可以精準(zhǔn)定位到切片區(qū)域、是否可以區(qū)分正確的目標(biāo)區(qū)域/細(xì)胞類型、能否進(jìn)一步制定出可執(zhí)行的顯微切割方案,需要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定切片方向和切片深度,以及切片染色方案和成像效果。綜上,從組織塊樣本出發(fā)的預(yù)實(shí)驗(yàn)流程包含切片、染色、成像和分析4個(gè)環(huán)節(jié),預(yù)實(shí)驗(yàn)具有一定摸索性且可能周期較長;從染色后的切片樣本出發(fā)(且切片貼于空間組學(xué)專用膜片),僅需成像和分析2個(gè)環(huán)節(jié),在對成像進(jìn)行質(zhì)控分析合格后即可立即開展正式實(shí)驗(yàn)。
(1)比較相同切片不同區(qū)域,即同一張切片上可以切割收集多管樣品,進(jìn)行不同組織微環(huán)境區(qū)域/不同細(xì)胞類型之間的蛋白質(zhì)表達(dá)譜比較。(2)比較不同時(shí)空狀態(tài)或不同實(shí)驗(yàn)處理的組織切片樣本中相同區(qū)域的蛋白質(zhì)表達(dá)譜變化。
建議至少設(shè)置3個(gè)重復(fù),可以是技術(shù)重復(fù),也可以是生物學(xué)重復(fù)。顯微切割收集1管樣本為1個(gè)樣本。1管樣本的切割收集總面積建議在0.3mm2以上,一般為相同切片上的幾個(gè)-幾十個(gè)最小目標(biāo)切割單元/區(qū)域的面積總和。
建議用石蠟包埋或OCT包埋。石蠟包埋,一般FFPE樣本,染色成像質(zhì)量相對更好,切片厚度4 μm,4 ℃低溫寄送即可。OCT包埋,一般OCT冰凍組織樣本,切片厚度10 μm,需要干冰寄送。
可以,一般建議同一份樣本提供不少于5張連續(xù)切片,用于預(yù)實(shí)驗(yàn)、正式實(shí)驗(yàn)及備用,樣品需要貼在空間組學(xué)專用膜片上,需要避免切片上出現(xiàn)劃痕、褶皺和雜質(zhì)等影響成像質(zhì)量和細(xì)胞定位。